C, corrente Na rappresentativa indotta dall'acido in un ovocita che co-esprime
reebok scarpe ASIC1a / 2a e CFTR. D, corrente rappresentativa di Na rappresentata da acidi in un ovocita che esprime ASIC1a / 2a e F508-CFTR. Queste tracce di corrente di cellule intere sono state registrate da ovociti isolati dalla stessa rana e nello stesso punto temporale (48 h) dopo l'iniezione di cRNA. Questi esperimenti sono stati ripetuti più di 5 volte. Le barre di scala per l'asse x (2 s) e l'asse y (5 ¼A) sono applicate a tutti e quattro i pannelli. Per evitare qualsiasi corrente proveniente dai canali ionici endogeni attivati dall'iperpolarizzazione, che sono attivati a potenziali di membrana più iperpolarizzati di "140 mV ( 47), sono state ottenute le correnti di Na esadecimate associate all'acido associate agli ASIC mentre gli ovociti sono stati bloccati a -60 mV.
Per affrontare il problema di una possibile dipendenza intracellulare di sodio dalla regolazione di ASIC da parte di CFTR, abbiamo co-espresso CFTR con un mutante di guadagno di funzione di ASIC2a, vale a dire G430F. Come mostrato nella Figura 8, l'espressione
reebok classic di G430F-ASIC2a da sola mostrava una corrente di Na verso l'interno costitutivamente attivata a pH e 7,5. L'applicazione del pH acido e (4.0) ha smascherato una nuova conduttanza Na sensibile all'acido aggiuntiva in 6 di 7 ovociti che esprimono G430F-ASIC2a. La corrente Na sensibile all'acido associata a G430F-ASIC2a ha impiegato fino a 8 s per raggiungere la sua attività massima e
reebok 85 club c non ha mostrato alcuna tendenza a inattivarsi durante il periodo di osservazione (10 s).
Se la co-espressione CFTR aumenta la velocità della carica positiva che fluisce attraverso il canale eteromultimico ASIC1a / 2a, anche il potenziale di membrana dovrebbe essere regolato dal pH acido e. Questa idea è stata testata nell'attuale modalità di bloccaggio usando lo stesso protocollo per l'applicazione di pH e acido. Il potenziale di membrana a riposo medio di ovociti non iniettati a pH e 7,5 era "43 ± 5 mV (n = 10, 3 rane) e "35 ± 2 mV (n = 57, 11 rane) per gli ovociti iniettati ASIC1a / 2a e "42 ± 2 mV (n = 38, 6 rane, Fig. 9) per ovociti iniettati con CFTR
reebok crossfit ASIC1a / 2a. Come mostrato in Fig. 9 C, la variazione netta del potenziale massimo di membrana depolarizzata ( E m) a pH e 4.0 negli ovociti che co-esprimono ASIC1a / 2a con CFTR era di 39 ± 3 mV (n = 6), significativamente maggiore ( pn = 6).
Il tasso di decadimento (2 s) del potenziale di membrana, calcolato mediante adattamento con un esponenziale del primo ordine, era in parallelo con Ä i delle correnti Na associate all'acido associate all'ASIC1a / 2a (1,5 s). Queste osservazioni indicano che c'era un accoppiamento tra la corrente di Na protonata e la depolarizzazione del potenziale di membrana indotta da protoni, suggerendo che la depolarizzazione del potenziale di membrana derivava dall'ingresso di carica positiva trasportata da Na attraverso ASIC. il presente studio doveva esaminare l'ipotesi che il CFTR potesse interagire con altri membri della superfamiglia ENaC / DEG, gli ASIC.
Abbiamo ipotizzato che il determinante cruciale per gli effetti contrastanti del CFTR sugli ENaC e sugli ASIC potrebbe essere i conseguenti cambiamenti nel potenziale di membrana e nella concentrazione di sale citosolico. Tuttavia, la non interazione di G430F-ASIC2a e CFTR ha escluso questa possibilità (Fig.
. Questi risultati hanno anche suggerito, poiché il percorso di trasporto del Na attivo (Na / K-ATPase) non è in grado di tenere il passo con la perdita di Na passiva (canale Na, antigene Na / H, ecc.), Portando ad accumulo di Na citosolico e depolarizzazione del potenziale di membrana eventualmente accompagnato da acidosi, il CFTR non regolerebbe in modo eccessivo gli ASIC per proteggere la funzione neuronale.
Al contrario, la funzione ENaC dipende in modo
reebok nano 8 critico dallo stato del CFTR in un epitelio puramente assorbente il sale e l'ENaC non può essere attivato nei dotti delle ghiandole sudoripare della fibrosi cistica in cui il CFTR è difettoso o assente (56). Inoltre, l'effetto della sovraespressione di ENaC sul CFTR negli ovociti di Xenopus (8, 10) è diverso da quello osservato nell'epitelio endometriale di topo (57). Una spiegazione per queste diverse osservazioni tra CFTR ed ENaC è che è dovuto a forme varianti di ENaC e CFTR. In alternativa, diversi componenti accessori che operano in diversi sistemi
cellulari possono essere alla base di questi effetti differenziali (56).
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